1、解冻
将血清从-20度冰箱中取出,室温(或浸于自来水中)解冻(约需要30分钟至2小时,也可放于4度冰箱解冻过夜;解冻后若不马上灭活,可以放入4度冰箱中暂时保存)
2、灭活
(1)放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个空的血清瓶,内装100ml自来水,插入一根温度计,温度监控以此为准)
(2)当温度计显示56度时,停止加热,改为间断加热,维持56度(±0.5度)30分钟(±3分钟;若不小心使温度上升超过56度,则:若仍未超过60度,且时间很短,比如不超过5分钟,则仍可使用;若超过60度,或者时间较长,则弃去不用,或者尝试用于一些普通细胞的培养)
(3)取出,自然冷却至室温(约需1-3小时),可分装或-20度继续冻存。
3、分装
(1)转入无菌间,在超净台内将血清分装入10ml离心管中(注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀;用吸液管或吹大管吹出血清时要注意:不要吹出气泡(血清很粘稠,很容易产生气泡;如果产生气泡,则在酒精灯火焰上过一下))
(2)放入-20度冰箱冻存
(3)全部操作约需要4-6小时
小牛血清和胎牛血清有何区别
- 来源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
- 组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。
- 血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ,应先将血清至于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
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