一.设备: 无菌操作设备。
二.大型设备CO2培养箱:恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值。
倒置显微镜:用于每天观察贴壁细胞生长情况。
解剖显微镜,用于准确地取材。
常温冰箱:-4℃,用于保存各种培养液,解剖液和鼠尾胶。
低温冰箱:-20℃--80℃,用于储存血清酶,贵重物品和试剂。
电热干烤箱:用于消毒玻璃器皿。高 压消毒锅:用于消毒培养皿,手术器械。
过滤器:配制解剖液、培养液,必须过滤后才可使用,以去除细菌。
渗透压仪,pH剂,天平等。
三.培养器皿及手术器械
1.培养皿:常用35mm塑料及玻璃皿,解剖取材用15mm-90mm直径。
2.培养板,24-40孔,可用于开放培养。
3.培养瓶;
4.吸管,常用1,5,10ml,均需泡酸、洗涤、灭菌后方可使用。
5.各类培养液贮存器。
6.小型手术器械。
准备:
一.配制培养液
(1)解剖液:以无机盐(去除Ca2+, Mg2+)加葡萄糖配制成PBS缓冲液,保持一定的渗透压和pH值。
( 2)基础培养基(MEM):主要为多种氨基酸,加入葡萄糖,双蒸馏水溶解。
( 3)接种培养液:用于胰酶消化后的细胞分散,做成细胞悬液,其成分为MEM含1%谷氨酰胺,另加入10%马血清,当天配制。
(4)维持培养液:接种后24h,全部换成此液,后每2周换一次,每次换1/2。其成分为MEM中含5%马血清,1%谷氨酰胺,及适量的支持性营养物质。
二.培养基质 常用鼠尾胶、小牛皮胶,多聚赖氨酸,再涂胶
三.消毒培养皿的备用。所有培养器皿均需清水冲洗2-3d,达两次ddH2O,每遍洗刷3-4次,加塞包装,置于烤箱中干燥消毒,于培养前1天进行。 |