实验材料:手术剪1把、手术钳2把、眼科剪刀2把 、眼科镊子1把 、大头针4个、手术刀片、无菌1×PBS约500ml 20%FBS的DMEM、5ml小皿3个、 10ml大皿1个、杀鼠板1块。(以上均为无菌物品)
实验步骤
1、 150-200gSD-大鼠,短头,浸入75%的酒精中15min
2、 置入超净台中,将大鼠固定于杀鼠板上,在无菌条件下打开腹腔,分离出胸主、腹主,摘出。
3、 PBS清洗3遍,剥去外膜,用手术刀片刮去内膜,留下中膜并将其移入1ml的培基中、剪成1×1mm大小组织块。
4、再将PBS清洗组织块,移入25ml的培养瓶中,用尖嘴弯管均匀贴好组织块,放入37度5%CO2的培养箱倒置培养6小时后,待组织块贴壁后,再加入2.5ml培养液后放回37度5%CO2的培养箱中。 注意:最后加入2ml培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下,勿使组织块吹下。
5、 随后每3天予以全量换液。
6、 3-5天后可见组织块周围有细胞爬出,大约2周后80%融合。
本人曾做过3个月的SD大鼠VSMC的原代培养,基本上的所有的障碍都遇到过,现在已做的相当成功,并乐意与大家分享经验! |